Molekularbiologen routinemäßig platzieren Fragmente von DNA - Plasmide - die Gene von Interesse in Bakterien. Dies ist eine einfache Möglichkeit, replizieren und mehr des Gens und /oder Erzeugen des Gens Produkt, das etwas wie Insulin sein kann . Elektroporation
Elektroporation ist eine Methode für das Erhalten der Plasmid in Bakterien. Bakterien und DNA in einem Rohr vermischt und belichtet, um ein elektrisches Feld durch eine Elektroporation Maschine hergestellt . Das elektrische Feld schlägt kleine Löcher in die Bakterien , so dass die DNA in die Zellen. Bakterien , die sich der DNA am effizientesten sind elektrokompetente Zellen .
Methode
Elektrokompetente Bakterien wie E. coli durch eine Reihe von wiederholten Zentrifugationen hergestellt werden kann , zunächst entfernen ihr Wachstum mittel-und ersetzen Sie es mit ultra- reinem Wasser , und schließlich , um das Wasser mit Glycerin zu ersetzen. In den letzten Schritten werden die Bakterien in einem kleinen Volumen von Glycerin resuspendiert , eingeteilt in Rohren , in flüssigem Stickstoff eingefroren und gelagert langfristig in einem -80 Grad Celsius ( -112 Grad Fahrenheit ) Gefrierschrank.
Überlegungen
Dieses Protokoll wird in der Regel mit großen Volumina , die großen Flaschen , Rührwerke und Zentrifugen erforderlich gemacht . Es ist wichtig , dass die Schritte von der Ernte bis Lagerung alle auf eiskalte Temperaturen durchgeführt werden . Reinstwasser verwendet werden.
