Wissenschaftler routinemäßig überwachen Zellwachstum. Es kann ein Teil der regulären Zelle Wartung oder als Teil eines Experiments . Zum Beispiel könnte ein Versuch eingesetzt werden, um den Einfluss von drei verschiedenen Medikamenten auf das Wachstum von Zellen zu vergleichen. In diesem Fall sind vier Kolben von Zellen in der gleichen Konzentration eingerichtet , ohne irgendwelche Drogen als Kontrolle , und eine für jede der drei Medikamente . Die Zellen werden aus den Kolben in regelmäßigen Abständen, z. B. täglich , gezählt und aufgezeichnet entfernt . Die Zellzahlen sind in einem Diagramm gegen die Zeit aufgetragen , die Auswirkungen der Medikamente auf Zellwachstum im Vergleich zur Kontrolle ist. Things You
Cells in Suspension
Reagenzgläser
Pipetten
Wachstum mittel
Hämacytometer
Deckglas
KLICKZÄHLER
Objektiv Papier
Trypanblau brauchen
Mikroskop
anzeigen Weitere Anweisungen
Cells
1
Swirl Zellen vorsichtig , um eine gleichmäßige Suspension zu erhalten. Entfernen Sie ein Volumen von Zellen, wie zB 1,0 Milliliter (ml) , mit einer Pipette aufnehmen und in ein Reagenzglas. Verdünnen Zellen zu 100.000 bis 500.000 Zellen pro ml zu erhalten - dies sollte die rund 100 Zellen auf statistische Signifikanz erforderlich beim Zählen bieten
2
Dilute Zellen , wenn nötig, durch Zugabe von 9,0 ml Medium auf die. 1,0 ml der Zellen. Mischen und Aufnehmen der Verdünnung . Wenn Zellen noch zu konzentriert sind , entfernen Sie 1,0 ml verdünnten Zellen in ein frisches Röhrchen , fügen Sie 9,0 ml Medium , Mischen und Aufnehmen der Verdünnung . Säugetierzellen in der Regel im Bereich von 100.000 bis 5.000.000 pro ml wachsen, sollten so 0-2 Verdünnungen ausreichend sein.
3
Mischen Sie die Zellen aus der endgültigen Verdünnung . Entfernen Sie ein kleines Volumen, wie 0,1 ml, und in ein neues Röhrchen . Fügen Sie dem gleichen Volumen Trypanblau , Mischen und Aufnehmen der Verdünnung . Tote Zellen nehmen Trypanblau und erscheint unter dem Mikroskop blau.
Zählen
4
polieren Hämazytometer und Deckglas mit Objektiv Papier und Deckglas auf hemocytameter Netz. Fügen Sie einen Tropfen der verdünnten Zellen an die V- Form neben dem Raster. Zellen bewegen sich unter dem Deckglas durch Kapillarwirkung .
5
Platz der Schieber am Mikroskop , auf dem Gitter konzentrieren und KLICKZÄHLER die lebensfähigen , nicht blau, Zellen zu zählen . Zellen sollten nicht überlappen ; wenn zu dicht , führen Sie eine weitere Verdünnung . Wenn Zellen zu verdünnt sind , bereiten eine konzentriertere Probe.
6
entfernen Hämazytometer , sauber, neu zu laden, und zählen Sie es erneut. Zählen Sie jede Zelle Probe dreimal.
Berechnung
7
Berechnen Sie die Anzahl der Zellen pro ml . Die Hämazytometer Gitter ist in 9 großen Quadraten , die jeweils mit einem Volumen von 0,1 ml aufgeteilt.
8
Teilen Sie die Anzahl der Zellen, die durch die Anzahl der großen Plätzen verwendet ( neun , wenn Sie das gesamte Netz nutzen ) gezählt und multiplizieren mit 10.000 Zellen pro ml zu erhalten . Multiplizieren mit dem Verdünnungsfaktor ( s ) für die endgültige Konzentration .
9
Nimm das Datum, die Probe , Zellzahlen , Verdünnung Faktoren und endgültige Zellzahl pro ml . Bereiten Sie eine graphische Darstellung der Zellzahlen aufgetragen gegen die Zeit , um das Zellwachstum zu zeigen.
