LacZ ist ein bakterielles Gen , das das Enzym beta -Galactosidase , die bricht Laktose in Glukose und Galaktose produziert . Das Enzym spaltet auch die Verbindung X -gal , das eine blaue Farbe, die Molekularbiologie Verwendung als Marker -oder Reportergruppe , die Anwesenheit des LacZ-Gens in Zellen verfolgen erzeugt . Transfektion
Wissenschaftler verbinden die LacZ -Gen mit einem Gen von Interesse , wie Insulin, mit einem Fragment von DNA Plasmid genannt . Sie verwenden chemische oder elektrische Transfektionsmethoden , um das Plasmid in die Zellen zu erhalten. Die Zellen für die LacZ-Expression von beta- Galaktosidase , die auch markiert wird die Anwesenheit des Insulin -Gens getestet.
Fixierung
Nach der Transfektion werden die Zellen gezüchtet eine Kunststoff- Petrischale. Für den Test wird das Wachstumsmedium entfernt und die Zellen werden mit phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS). Ein frischer Fixierlösung Formaldehyd , Methanol und Glutaraldehyd verwendet wird , um die Zellen für zwei Minuten zu beheben. Der Fixateur wird entfernt und die Zellen erneut gewaschen mit PBS .
X- gal
Ein frischer Färbelösung , die X- gal enthält , Kalium- ferri - und Kaliumcyanid ferro - Cyanid zu den Zellen gegeben über Nacht . Die Zellen werden erneut mit PBS gewaschen , und wenn das LacZ-Gen vorhanden ist, die Beta -Galactosidase wird die X- gal gespalten sind und die Zellen werden blau.
