Fluoresceinisothiocyanat , die gemeinhin als FITC bezeichnet - ausgesprochen " fit -c ", mit " ditsy " Reim - eine fluoreszierende Markierung, die chemisch gebunden oder konjugierte , an andere Moleküle wie Proteine und Antikörper. Ein Antikörper, konjugiert mit FITC könnte auch als bezeichnet " FITC- markierter Antikörper ist. " FITC wird durch Licht bei einer Wellenlänge von 488 nm angeregt und gibt fluoreszierende Energie bei 530 nm detektiert. Ein Wissenschaftler kann es mit einem Fluoreszenz-Mikroskop oder Verwendung Ausrüstung, die die Fluoreszenzemissionen und zeichnet sie erkennt sehen . Methoden
FITC Konjugation folgt eine grundlegende Protokoll . Zum Beispiel würde ein Antikörper FITC und zusammen in einem bestimmten Verhältnis in einem Teströhrchen vermischt und gedreht werden, bei Raumtemperatur für eine Stunde. Ein Glasrohr mit einem Korn- wie Gel, das den konjugierten FITC binden gefüllt - Um die ungebundenen FITC aus der Lösung zu entfernen, wird es auf eine Affinitätschromatographiesäule gegossen. Inzwischen hat die FITC- markierten Antikörper wird durch die Säule fließen und ist für den Einsatz gesammelt .
Überlegungen
Vor Beginn einer Konjugation , sollte der Forscher betrachten mehreren Punkten . Erstens ist FITC sehr instabil und sollten nicht dem Licht ausgesetzt werden - es sollte in Folie bedeckten Röhren zu allen Zeiten gehalten werden. Zweitens kann die Konjugation Zeit und Temperatur , um eine Temperatur -sensitive Protein verändert werden. Schließlich können unterschiedliche Proteine und Antikörper unterschiedliche FITC- Bindungsstellen , so finden die richtige Verhältnis von Antikörper gegen FITC kritisch ist , zu wenig FITC ist ein Antikörper nachweisbar und zu viel kann seine Spezifität zu verändern. Aus diesem Grund sollte vorläufigen kleinen Konjugationen mit verschiedenen Verhältnissen von FITC Antikörper parallel aufgebaut werden. Sobald das optimale Verhältnis hergestellt wird, die groß angelegte Konjugation durchgeführt werden.
Verwendet
Ärzte und Wissenschaftler verwenden FITC- markierte Antikörper , Hormone und Wachstumsfaktoren Faktoren in einer Vielzahl von Assays und Anwendungen. Zum Beispiel hat ein Stammzellen im Blut ein Molekül auf ihrer Oberfläche CD34 genannt . Ein Labortechniker kann dem Blut des Patienten mit einem FITC -markierten Antikörper, der spezifisch für CD34 mischen , und führen die Zellen durch ein Durchflußzytometer , die einen Laserstrahl verwendet , um die FITC fluoreszieren . Weiter trennt die cytometer die fluoreszierenden CD34 -Zellen aus dem Rest der Blutkörperchen , und die Ärzte können diese isolierten Stammzellen für therapeutische Behandlungen.
