CFSE oder Carboxyfluoreszein -Succinimidyl - Ester-, eine fluoreszierende Zelle Färbelösung in Lymphozytenmigration Studien verwendet. Lymphozyten sind die das Blut der weißen Blutkörperchen , die die Fähigkeit , sich aus dem Blutstrom auf fremde Mikroorganismen zu erfassen, spielen eine wichtige Rolle im Immunsystem - Verteidigung haben . CFSE können auch zur Markierung von Thymozyten und embryonale Zellen verwendet werden , nach " Immunologie und Zellbiologie . " Menschliche Lymphocite Färbeprotokoll
Techniker bereiten eine Zellsuspension mit 20 Millionen Zellen pro ml in 0,1 Prozent fötalem Rinderserum ( FBS) und Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung (PBS). Sie fügen hinzu, und lassen CFSE Suspension acht Minuten sitzen , nach The University of Kansas Medical Center. Vorgewärmte FBS zugegeben und die Zellen werden in einem Wasserbad bei 98,6 Grad Celsius für 10 Minuten inkubiert. Die Zellen werden dann für fünf Minuten zentrifugiert, Überstand verworfen und die Zellen werden in einer Lösung von 2 Prozent FBS /PBS dreimal gewaschen. Die Zellen werden mit Paraformaldehyd fixiert .
Vereinfachte CFSE Färbeprotokoll
Techniker Blutproben zentrifugiert , wodurch die roten Blutkörperchen . Später , waschen sie die Lymphozyten mit PBS auf freiem Protein zu entfernen. Um in der Lage, die Zellteilung nach zwei Tagen zu beobachten, CFSE in geringen Konzentrationen acht Minuten lang zugegeben wird, dann wird die Reaktion mit fötalem Kälberserum blockiert. Die Zellen werden zweimal mit PBS /FCS gewaschen. Dieses Protokoll kann in " in vivo " verwendet werden oder " in vitro "-Experimente , nach The Hedrick Lab an der University of California .
Protokoll für die Aktivierung naiver CD8 -T-Zellen in vitro
eine naive T -Zelle ist eine Lymphozyten , die im Knochenmark differenziert hat . Dieser Zelltyp wird als ausgereift , und die Zellen auf neue Krankheitserreger , die das Immunsystem noch nie begegnet zu reagieren. Techniker inkubieren Influenza -Virus -und Zellproben auf Eis für 30 Minuten zentrifugiert und Fortsetzung der Inkubation Prozess für 18 Stunden bei 98,6 Grad Celsius. Später werden die Zellen mit CFSE gefärbt und die Ergebnisse werden unter Durchflusszytometrie analysiert .
